DiI、DiO、DiD 和 DiR 属于长链二烷基羰花青化合物，是一系列亲脂性的荧光染料，可用于细胞膜和其它脂溶性生物结构染色，是一类环境敏感型荧光染料。当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数，极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。

      DiD 是 DiI 的衍生物，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD 可被 633nm 的氦-氖（He-Ne）激光所激发，呈红色荧光，在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，进入细胞后，染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞染色。

产品参数

      激发/发射波长：644/663nm

      运输条件：常温

      储存条件：-20℃，避光

      分子式：C61H99ClN2O4

      分子量：959.92

      CAS号：127274-91-3

实验步骤

      制备储存液

      将固体染料溶于DMF或DMSO或乙醇配制为1 mM的储存液。配制好的储存液，在避光-20°C的条件下至少可以保存6个月。

悬浮细胞的染色

      1 将细胞以 1 × 10^6/ml 的密度悬浮于无血清培养基中；

      2 每 1ml 细胞悬液加入 5µl 细胞染色液，混匀；

      3 37°C 孵育 1~20 分钟。不同类型的细胞孵育条件不一样，可参考表格 1。初始孵育时间可选择 20 分钟，然后再进行优化；

      4 将孵育后的细胞悬液 37°C，1500rpm，离心 5 分钟；

      5 弃去上清，用 37°C 的培养基轻轻悬浮细胞；

      6 重复以上洗涤步骤（1.4 和 1.5）两次；

      7 放置 10 分钟后测定荧光信号。

悬浮细胞的染色

      1 放置干净的载玻片在培养皿内，让细胞爬片生长至合适浓度；

      2 取出爬片，用吸水纸从边缘轻轻吸去多余的培养基，然后将爬片放置于湿盒内；

      3 配制染色液：每 1ml 培养基加入 5µl 细胞染色液；

      4 用移液器吸取 100µl 步骤 2.3 中配制好的染色液，从边角处加入爬片，轻轻摇动使所有染色液覆盖整个爬片；

      5 将爬片置于 37°C 孵育，不同类型的细胞孵育的时间不尽相同（参考表 1）；对于未在表中列出的细胞类型，建议孵育时间设为 20 分钟，然后再进行优化以获得均一的染色效果；

      6 吸去染色液，加入温育过的培养基孵育 10 分钟，重复此洗涤步骤三次。

案例分析