Acridine orange ，吖啶橙，是一种细胞核荧光染料，具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和 RNA 染色。它与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与 DNA 结合发绿色荧光，与 RNA 结合发桔黄色或桔红色荧光。这一特性使得它常被用于检测细胞周期，也可用于检测细胞溶酶体。

产品信息

      化学名：Acridine orange

      分子式：C17H20ClN3

      分子量：301.82

      CAS号码：65-61-2

实验操作

      方法一：

      1.收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1 次，计数并调节细胞浓度至106/ml。

      2.取适量的细胞悬液，加入AO 染色液(1mg/ml)，使AO 终浓度为8.5～17μg/ml，轻轻混匀。

      3.室温避光染色15～20min，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。

      4.荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。

      方法二：

      1. Acridine orange 的推荐工作浓度为 1 μg/ml，使用前可先溶于纯水配制成浓度为 100 μg/ml 的染色储备液。

      2. 对于贴壁细胞或细胞爬片：先吸除培养基，用 PBS 清洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的 PBS；如需观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可直接在培养基中加入染色液。

      3. 对于悬浮细胞：可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入染色液。

      4. 推荐的染色孵育时间为 5-15 分钟。但由于不同细胞对 Acridine orange 的摄取能力不同，需根据具体的细胞类型摸索最佳的染色条件。

案例分析

注意事项

      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。