乙酰氧甲基（AM）的酯衍生物及其螯合剂组成的荧光探针广泛应用于活细胞研究中。羧酸经过修饰转化成 AM 酯基团变成不带电荷的分子，具有细胞膜通透性；一旦进入细胞内，亲脂性的保护基团发生非特性的水解，从而生成带电荷形式的分子滞留于细胞内。通常情况下，如果不发生水解，AM 酯形式的探针为无色荧光状态；这一特性可用于判断存储液是否发生自发水解。用于荧光探针的酯基与 AM 酯类似，处理方法基本一致。

使用指南

      注意：产品中不包含可能需要使用到的 20% Pluronic F-127 助溶剂，客户需要另外购买或准备。

配制储存液

      请使用高纯级的无水 DMSO 溶解产品，DMSO 应存放于密封好的氩或氮气并保持干燥。纯的乙酰氧甲基（AM）或其醋酸酯在 DMSO 中的溶解度较小（约 1 mg），溶解缓慢。由于溶剂极易吸水从而导致染料发生降解，配制好的储存液应密封良好，在干燥条件下冷冻保存，储存液在适当的条件下至少可以稳定存放 6 个月，如需连续使用，请在配制后尽快用完。建议用户尽量配制高浓度的浓缩储存液以减少溶液中 DMSO 的含量(理想值 ≤ 0.1%)。

使用 Pluronic F-127 助溶剂

      由于某些 AM 酯不溶于水，常常用低毒性的 Pluronic F-127®作为染料的助溶剂。可以将这种非离子型去污剂溶于 DMSO，配成终浓度为 20%（w/v）的溶液，然后用于配制染料储存液。40℃温和加热可以促进 Pluronic F-127®在 DMSO 中的溶解，但 Pluronic F-127®会降低乙酰氧甲基酯的稳定性，因此建议仅在配制染色工作液时加入。

      注意：无论是否使用 Pluronic F-127®，请尽量将产品配制成高浓度浓缩储存液以减少溶液中

      DMSO 的含量(理想值≤ 0.1%)。

乙酰氧甲基及其酯类的细胞染色

      本说明仅就产品向用户作简单的介绍，请根据染料种类与细胞类型查阅文献来确定具体的实验操作规程。一般来说，AM 酯与醋酸酯类的使用终浓度为 1~10 µM，实验中尽量使用最小浓度的 AM 酯，以降低由乙酰氧甲基酯水解副产物（甲醛和乙酸）产生的假阳性信号。染料与样品在室温条件下孵育，时间一般控制在 15 分钟至 1 小时。但有研究者发现在 37℃的生理温度条件下进行染色效果更好。Pluronic F-127®可以增强染色效果并降低染色相迁移现象。为了尽量减少乙酰氧甲基酯与醋酸酯类的细胞外水解，建议用户尽量避免使用含有 PBS 等含仲胺和伯胺的缓冲液。另外，血清可能含有内源性酯酶活性的物质也必须避免，直到染色完成后。染色后须用不含染料的缓冲液冲洗细胞样品。

案例分析