CFDA,SE 的英文全称为 Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞渗透性荧光染料，不仅可用于细胞增殖的体外实验，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。CFDA,SE 可以通过细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶（esterase）催化分解成 CFSE，CFSE 可以偶发性地、不可逆地和细胞内蛋白的赖氨酸残基或其它氨基酸发生结合反应，并标记这些蛋白。加入荧光探针CFDA 后大约 24 小时，即可充分标记细胞。被 CFDA,SE 标记的非分裂细胞的荧光信号非常稳定，荧光信号可稳定保持数月。CFSE 标记细胞的荧光信号非常均一，优于以前使用的其它细胞示踪荧光探针，例如 PKH26。且分裂后的子代细胞的荧光信号分配亦很均匀。由于 CFDA,SE 标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光信号强度会减弱一半，这样通过流式细胞仪就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞（1/2 荧光信号强度），分裂两次的细胞(1/4 荧光信号强度)，分裂三次的细胞(1/8 荧光信号强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。

      CFDA,SE 标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞分裂增殖检测，最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK 细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。

      本品为粉末状固体，如需长期储存，请置于-20℃干燥避光保存，有效期为 1 年。

      使用前需溶于 DMSO 配制成储备液后保存备用。

产品参数

      化学名称: 5-(and-6)-Carboxyfluorescein Diacetate N-succinimidyl ester

      分子式: C29H19NO11

      分子量: 557.47

      CAS 号: 150347-59-4

实验步骤

      注意：以下是活细胞染色的推荐步骤，可根据实际情况进行适当调整。

      1. 离心收集细胞，调整细胞浓度为 1-5×105 个/管；

      2. 用 500 µl CFDA,SE 工作液悬浮细胞，于室温或 37℃避光孵育 10-30 分钟；

      3. 吸除染液，用 HBSS 或其他合适的缓冲液清洗细胞，用 500 µl 预热 HBSS 或培养液悬浮细胞；

      4. 在 Ex/Em=490/520 nm 下用流式细胞仪（FL1 通道）或荧光显微镜观察细胞。

实验说明

      1. 制备标记储存液：将 CFDA,SE 粉末溶于适量 DMSO，使其浓度为 1~5 mM（推荐直接配制成 5 mM 的浓度，之后按实际需求考虑是否需要稀释，1 mg/ml 的 CFDA,SE 溶液浓度相当于其摩尔浓度 1.8 mM）。

      2. 标记细胞与检测：CFDA, SE 工作液的浓度需根据标记的细胞类型及时间长短适当调整优化。

      建议短期标记工作液浓度：0.1 µM；

      1~2 天时长的示踪标记，工作液浓度为：1~5 µM；

      注意：标记的细胞呈绿色荧光，检测时的激发波长可以选择 488 nm，此时的发射波长为518 nm。使用流式细胞仪检测时可以采用 FL1 Detection Chanel。

案例分析

注意事项

      CFDA,SE 配制成储存液后宜在一个月内使用完毕，最长请勿超过 2 个月。CFDA ,SE 易被水解，在水溶液中会很快变质，在使用过程中应尽量避免产品与水接触（标记细胞过程中除外）。

      CFDA,SE 溶剂在 4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内。可在 20~25℃水浴温育片刻至全部溶解后使用。

      不同细胞其细胞内酯酶的活性不同，因此染色效果可能会有差异。

      荧光染料不可避免的存在淬灭问题，请存放及操作时尽量注意避光，以减缓荧光的淬灭。

      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。