磁珠法DNA片段分选试剂盒 (ABC3631)
  • 磁珠法DNA片段分选试剂盒 (ABC3631)
价格:8571.0

产地:ABC

货号:ABC3631

规格:50 T

备注:可对PCR体系和酶切体系进行200 bp-1500 bp DNA片段的纯化与分选,操作简单快捷

产品简介

      本试剂盒利用超顺磁性磁珠高效吸附核酸的特性,再配合特别优化的缓冲体系,通过添加不同比例的分选液,可进行200 bp-1500 bp DNA片段的纯化与分选,整个操作过程简单、快捷,可对PCR体系、酶切体系的DNA纯化等,通过分选获得的DNA片段可广泛应用于NGS(Next Generation Sequencing)文库构建。

储存与运输

      冰袋(wet ice)运输,2-8℃储存;有效期12个月。

使用前准备

      1. 使用前请配置80%乙醇,最好现配现用。

      2. 自备磁力架。

实验步骤

一、DNA片段纯化步骤

1. 提前将DNA片段分选试剂从2-8℃取出,使其温度恢复至室温;

2. 上下颠倒DNA片段分选试剂,使磁珠分散均匀,向DNA样品中加入1.8倍体积的DNA片段分选试剂,用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置5 min,期间使用移液器吹打混匀2-3次;

3. 将离心管置于磁力架上30 s,待上清清澈后,吸弃上清;

4. 加入200 µL 80%的乙醇,移开磁力架,使用移液器吹打至磁珠分散均匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,待上清清澈后,吸弃上清;

5. 重复步骤4;

6. 将离心管盖打开,室温晾干5-10 min,使乙醇完全挥发(避免磁珠过度干燥,以免影响核酸得率);

7. 移去磁力架,向离心管加入20-50 μL Buffer TE或Nuclease-free Water,使用移液器吹打至磁珠分散均匀,室温静置5 min;

8. 将离心管移至磁力架上至磁珠全部吸附至管壁,吸取上清至一新的离心管中,即得高纯度的DNA。

二、DNA片段分选步骤

1. 提前将DNA片段分选试剂从2-8℃取出,使其温度恢复至室温;

2. 第一次结合:上下颠倒DNA片段分选试剂,使磁珠分散均匀,根据需要得到的片段范围按照表1加入第一次片段分选试剂用量;

3. 用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置5 min,期间使用移液器吹打混匀2-3次;

4. 将离心管置于磁力架上30 s,待上清清澈后,将上清转移至一新的离心管中;

备注:样本量×第一次分选试剂用量比例=分选液加入量,如100 µL样本× 0.6=60 µL分选液;

5. 第二次结合:根据表1向上述离心管中加入0.1倍样体积的DNA片段分选试剂;

备注:样本量×第二次片段分选试剂用量比例=分选液加入量,如100 µL样本× 0.1=10 µL分选液;

6. 用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置5 min,期间使用移液器吹打混匀2-3次;

7. 将离心管置于磁力架上30 s,待上清清澈后,吸弃上清;

8. 加入200 µL 80%的乙醇,移开磁力架,使用移液器吹打混匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,待上清清澈后,吸弃上清;

9. 重复步骤8;

10. 将离心管盖打开,室温晾干5-10 min,使乙醇完全挥发(避免磁珠过度干燥,以免影响核酸得率);

11. 去掉磁力架,向离心管加入30-50 μL Buffer TE或Nuclease-free Water,使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置5 min;

12. 将离心管移至磁力架上至磁珠全部吸附至管壁,吸取上清至一新的离心管中,即得高纯度的DNA。

表1:DNA片段分选推荐分选液用量表

分选片段平均长度(bp) 200-300 250-350 300-450 400-550 500-700 600-800 800-1000 1000-1500
第一次片段分选试剂用量 0.9× 0.85× 0.8× 0.75× 0.7× 0.65× 0.6× 0.5×
第二次片段分选试剂用量 0.1× 0.1× 0.1× 0.1× 0.1× 0.1× 0.1× 0.1×


注意事项

1. 操作之前,请务必认真阅读本产品说明书。

2. DNA片段分选样本量低于100 µL,可加水补至100 µL,样本量过少易使磁珠实际加入量不准,进而影响分选效果。

3. 磁珠易沉淀,使用前务必混匀。

4. 磁珠悬液在保存过程中避免冷冻。

5. 洗脱前,应使乙醇完全挥发,避免残留的乙醇影响下游实验。

6. 请勿长时间干燥磁珠,以免影响DNA洗脱效率。

7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!

(产品包装升级中,以实物为准。)

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