本试剂盒采用专为核酸提取和纯化设计的超顺磁性磁珠提取新鲜血液样本的总RNA。本试剂盒通过特别优化的裂解液在去除红细胞后裂解白细胞释放其中的核酸，再通过具有分离作用的超顺磁性磁珠在一定条件下吸附RNA，改变条件后磁珠释放吸附的RNA，即可获得高纯度的RNA。不需要苯酚、氯仿等试剂，能够快速从小于1.5 mL的全血中提取高纯度RNA。提取的RNA可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等各种分子生物学实验。

储存与运输

      DNase，DTT Solution冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其他试剂室温运输，室温储存；有效期12个月。

使用前准备

1. Buffer BRL如有沉淀，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

2. 使用前请向Buffer BRL加入DTT Solution，至终浓度为4%，即1 mL Buffer BRL加入40 µL DTT Solution。此裂解液最好现配现用，加入DTT Solution的Buffer BRL可在4℃放置一个月。

3. 使用前请向Buffer RW1加入18 mL无水乙醇，向Buffer RW2中加入72 mL的无水乙醇。

4. 自备磁力架。

操作步骤

1. 红细胞裂解液稀释：使用Nuclease-free Water将10×Red cell Lysis Buffer稀释至1×备用（当血液样本量为200 µL时，则需要取140 µL 10×Red cell Lysis Buffer进行稀释）；

2. 取1体积的血液样本加入5体积的1×Red cell Lysis Buffer，混匀。如：当血液样本量为200 µL时，则需要加入1 mL 1×Red cell Lysis Buffer；

3. 置于冰上孵育15 min，期间上下颠倒混匀2-3次，当溶液变为半透明时，说明红细胞裂解完全。根据血液样本裂解的程度不同，可以将孵育时间延长至20 min；

4. 3,000 rpm，4℃离心10 min，将上清完全去除，请勿将白细胞沉淀吸出；

5. 向白细胞沉淀中加入2倍血液样本体积的1×Red cell Lysis Buffer（如：当血液样本量为200 µL时，则需要加入400 µL 1×Red cell Lysis Buffer），悬浮白细胞沉淀。；

6. 3,000 rpm，4℃离心10 min，将上清完全去除，勿将白细胞沉淀吸出；

7. 根据血液样本体积加入Buffer BRL悬浮白细胞沉淀（使用前请确认已加入DTT Solution）。当血液样本量小于0.5 mL时，加入400 µL Buffer BRL；当血液样本量为0.5-1.5 mL时，加入600 µL Buffer BRL；

8. 向离心管中加入2/3体积异丙醇，上下颠倒混匀，再加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需涡旋振荡至分散均匀），使用移液器吹打至磁珠分散均匀；

9. 室温静置10 min，放置过程中，使用移液器吹打混匀3-5次；

10. 将离心管移至磁力架上静置30 s，再将离心管随磁力架一起缓慢上下颠倒数次，将管壁残留的磁珠冲刷下来，待上清清澈后，吸弃上清；

11. 加入500 μL Buffer RW1，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，再将离心管随磁力架一起缓慢上下颠倒数次，将管壁残留的磁珠下来，待上清清澈后，吸弃上清；

12. 加入500 μL Buffer RW2，移开磁力架，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，再将离心管随磁力架一起缓慢上下颠倒数次，将管壁残留的磁珠冲刷下来，待上清清澈后，吸弃上清；

13. 移去磁力架，进行DNase消化：

      a） DNase反应液配制：取10 μL 10×DNase Buffer，10 μL DNase，80 μL Nuclease-free Water于Nuclease-free离心管中混匀；

      b） 向含有磁珠的离心管中加入100 μL DNase反应液，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置15 min，期间每5 min使用移液器吹打混匀一次；

      c） 消化结束后加入600 μL Buffer RW2，使用移液器吹打至磁珠分散均匀，将离心管移至磁力架上静置30 s，再将离心管随磁力架一起缓慢上下颠倒数次，将管壁残留的磁珠冲刷下来，待上清清澈后，吸弃上清；

14. 重复步骤12；

15. 将离心管盖打开，室温晾干5-10 min，使乙醇完全挥发（避免磁珠过度干燥，以免影响核酸得率）；

16. 移去磁力架，向离心管加入30-50 μL Nuclease-free Water，使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀，室温静置5 min；

17. 将离心管移至磁力架上至磁珠全部吸附至管壁，吸取上清至一新的Nuclease-free离心管中，即得高纯度的RNA。

注意事项

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品说明书。

2. 本试剂盒的最大样品处理量为1.5 mL（白细胞数量1×10⁷），如果血液中白细胞含量较高，可以按比例减少血液用量。

3. 本试剂盒适用于常规抗凝剂（包括肝素钠、EDTA、枸橼酸钠等）保存的血液RNA提取。

4. 磁珠悬液在保存过程中应避免冷冻操作；磁珠易沉降，使用前应充分振荡使其保持均匀的悬浮状态。

5. 加入磁珠前，需要将其他试剂混合均匀。

6. 洗脱RNA前应使乙醇完全挥发，避免残留的乙醇影响下游实验。

7. 请勿长时间干燥磁珠，以免影响RNA洗脱效率。

8. 实验时穿实验服，戴一次性手套，佩戴口罩，避免讲话，使用Nuclease-free的枪头、离心管。

9. 应使用RNA操作专用实验台与电泳设备。