产地:ABC
货号:ABC3626
规格:50T
备注:1.快速纯化得到高质量病毒DNA和RNA。2.操作简单,整个操作无需离心。3.适用下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物学实验。
本试剂盒设计用于从血清、血浆、尿液、细胞培养液上清、病毒原液及感染病毒的组织中快速分离各种病毒DNA/RNA。通过本公司自主研发的超顺磁性磁珠,在特殊的缓冲体系作用下,核酸特异的吸附于磁性粒子表面,蛋白、细胞碎片以及其他污染物可有效的被漂洗,最后用Nuclease-free Water洗脱得到高质量的DNA/RNA。得到的高质量DNA/RNA可直接进行下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物学实验。
储存与运输
Proteinase K和Carrier RNA冰袋(wet ice)运输,-20℃保存;其余试剂室温运输,室温储存;有效期12个月。
使用前准备
1. Buffer MVL和Buffer MPA如有沉淀现象,请于37℃加热溶解,待恢复室温后使用。
2. 首次使用前请向Buffer MPA中加入18 mL的无水乙醇,Buffer MPB中加入60 mL的无水乙醇。
3. 首次使用前可先将Carrier RNA分装后于-20℃保存,应避免反复冻融。
4. 使用组织研磨仪时,提前将研磨仪预冷。
5. 自备磁力架。
实验步骤
1. 病毒样本的处理:
a)血清、血浆、尿液、细胞培养液上清和病毒原液的裂解:取10-200 μL的血清、血浆、尿液、细胞培养液上清或病毒原液,起始量不足200 μL可用PBS或Nuclease-free Water补至200 μL。
b)感染病毒的组织裂解:取10-20 mg新鲜或超低温冻存的感染病毒的组织,置于装有2-3颗3 mm研磨珠(推荐ABC0221)的1.5 mLNuclease-free离心管或专用研磨管(推荐ABC-200-M)中,立刻将装有组织的离心管或研磨管置于液氮中,随后使用组织研磨仪(推荐ABC901001)在低温条件下将组织彻底研磨至匀浆状(如果组织没有被彻底匀浆,将会影响DNA/RNA的得率和质量),研磨后加入200 μL的PBS或Nuclease-free Water。
2. 加入200 μL Buffer MVL,20 μL Proteinase K和1 μL Carrier RNA,充分混匀后于56℃孵育10 min;
3. 加入200 μL无水乙醇,颠倒混匀,再加入20 μL SweMag Beads(SweMag Beads使用前需涡旋至分散均匀),上下颠倒数次,至磁珠分散均匀;
4. 室温放置10 min,期间使用移液器或涡旋仪混匀2-3次,至磁珠分散均匀;
5. 将离心管移至磁力架上静置30 s,直至磁珠完全吸附,将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请勿将磁珠吸出);
6. 移开磁力架,加入500 μL Buffer MPA,使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,再将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠和盐分冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请务必吸尽离心管内残留的液体);
7. 移开磁力架,加入700 μL Buffer MPB,使用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,将离心管移至磁力架上静置30 s,再将离心管随磁力架温和地上下颠倒数次,使管壁残留的磁珠和盐分冲刷下来,待上清清澈后,吸弃上清(为避免影响提取效率,请务必吸尽离心管内残留的液体);
8. 重复操作步骤7;
9. 将离心管盖打开,室温放置5–10 min,使乙醇完全挥发(避免磁珠过度干燥,以免影响核酸得率);
10. 移开磁力架,向离心管中加入50-80 μL Nuclease-free Water,用移液器轻轻吹打至磁珠分散均匀,室温静置3 min;
11. 将离心管置于磁力架上,直至磁珠完全吸附,吸取上清至一新的Nuclease-free离心管中,即得高纯度的DNA/RNA。
注意事项
1. 操作之前,请务必认真阅读本产品说明书。
2. 由于提取过程中加入了Carrier RNA,不能通过电泳或吸光度计测定定量。
3. 本试剂盒提供的Carrier RNA是大肠杆菌来源的RNA,主要是为了提高微量核酸的回收效率与防止得到的微量RNA被降解,如果PCR扩增引物与Carrier RNA具有较高同源性时,可重新设计引物。
4. 磁珠易沉淀,使用前应涡旋至磁珠分散均匀。
5. 磁珠悬液在保存过程中避免冷冻。
6. 向样本中加入磁珠前,需要将样本与其他试剂混合均匀。
7. 洗脱前,应使乙醇完全挥发,避免残留的乙醇影响下游实验。
8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!
(产品包装升级中,以实物为准。)
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