本试剂盒采用特殊的裂解缓冲体系与硅胶膜结合的纯化方式，能够快速地从小于100 mg的植物组织中提取总RNA，并有效的去除植物组织中的多糖、多酚、多脂等杂质，无需苯酚、氯仿等有机试剂。提取的高纯度RNA，可直接用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern杂交、cDNA文库构建、微阵列分析等各种分子生物学实验。

储存与运输

      DNase冰袋（wet ice）运输，-20℃保存；其余试剂常温运输，常温储存；有效期12个月。

使用前须知（请仔细阅读）

1. 采集的样本应立刻提取RNA或于-80℃保存，否则会导致提取的RNA的产量与质量下降。

2. Buffer PRL如有沉淀现象，请于37℃加热溶解，待恢复至室温后使用。

3. 使用前请在Buffer PRL中加入β-巯基乙醇，使终浓度为2%，即1 mL的Buffer PRL中加入20 µL的β-巯基乙醇。此裂解液最好现配现用，加入β-巯基乙醇后室温可放置1个月。

4. 使用前请向Buffer RW1和Buffer RW2中加入指定量（见瓶身）的无水乙醇。

5. 使用研磨仪研磨组织时，将研磨仪提前预冷。

操作步骤

1. 植物组织样本裂解：

a. （推荐）取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg，迅速转移到装有2-3颗3 mm的研磨珠（推荐ABC0221-150G）并用液氮预冷的2.0 mL RNase-free研磨管（推荐ABC-200-M）中，将研磨管置于研磨仪（推荐ABC901001）上（放置研磨管前将适配器于液氮中迅速预冷）进行研磨，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量）。然后加入500 μL Buffer PRL，使用移液器吹打至样本与Buffer PRL充分混合，室温放置5 min。

b. 取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg，迅速转移到用液氮预冷的1.5 mL RNase-free离心管中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量）。然后加入500 μL Buffer PRL，使用移液器吹打至样本与Buffer PRL充分混合，室温放置5 min。

c. 取新鲜或超低温冻存的植物组织50-100 mg，迅速转移到用液氮预冷的研钵中，加入液氮，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果样本没有完全研磨成粉末状，会影响RNA的收率和质量）。然后将研磨成粉末的样本加入到含有500 μL Buffer PRL的1.5 mL RNase-free离心管中，使用移液器吹打至样本与Buffer PRL充分混合，室温放置5 min。

2. 12,000 rpm，4℃离心5 min，将上清液转移至一新的RNase-free离心管中，尽量不要吸取沉淀；

3. 向离心管中加入与上清液等体积的无水乙醇，上下颠倒混匀；

4. 将上述混合液转移至RNA Spin Column（含Collection Tube）中，每次加入量不超过600 µL，如果超过600 µL可分批加入；

5. 12,000 rpm离心30 s，弃掉滤液。将RNA Spin Column重新放回Collection Tube中；

6. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW1，12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

7. 向RNA Spin Column中加入600 μL Buffer RW2（请沿RNA Spin Column管壁加入Buffer RW2，有助于冲洗管壁上残留的盐分），12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

8. DNase反应液配制：取5 µL 10×DNase Buffer，5 µL DNase，40 µL RNase-free Water于一新的RNase-free的1.5 mL RNase-Free离心管中混匀；

9. 向RNA Spin Column中央加入50 μL DNase反应液，室温静置15 min；

10. 向RNA Spin Column中加入500 μL Buffer RW2，12,000 rpm离心30 s，弃掉废液；

11. 重复操作步骤10；

12. 将RNA Spin Column放入Collection Tube中，12,000 rpm离心2 min；

13. 将RNA Spin Column置于一新的RNase-Free的1.5 mL的离心管中，室温放置3-5 min，使RNA Spin Column残留的乙醇完全挥发；

14. 向RNA Spin Column的膜中央加入50-100 μL RNase-free Water，室温放置5 min，12,000 rpm离心2 min，收集RNA。若要得到更高浓度的RNA，也可以将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column中，室温静置5 min，12,000 rpm离心2 min，再次收集RNA。

注意事项

1. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

2. 应使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

3. 应使用RNA操作专用实验台与电泳设备，并且在操作过程中佩戴口罩，防止所用器皿与试剂受到RNase的污染。

4. 如果在实验室以外的地方采集植物样本，需将样本置于携带的液氮或干冰中，避免影响提取的RNA的得率与质量。

附表：

本试剂盒对多种植物样本的RNA提取量见下表，RNA的提取量和植物的种类、部位、新鲜程度以及生长状态有关，下表仅供参考。