Hoechst 33342（bisBenzimide H 33342，HOE 33342）分子式为C27H28N6O·3HCl，分子量为561.93，CAS编号为23491-52-3，是一种可以穿透细胞膜对细胞核内DNA染色的蓝色荧光染料；该染色液在溶液中荧光较弱，但在AT序列富集区域的DNA小沟处与之结合后荧光增强，因此被用于细胞核染色，或者常规DNA染色。

      本产品为溶液形式，Hoechst 33342浓度为1 mg/mL，用于染色时，常用工作浓度推荐0.5-10 μg/mL。Hoechst 33342最大激发波长为346 nm，最大发射波长为460 nm；在与双链DNA结合后，最大激发波长为350 nm，最大发射波长为461 nm；可用于固定或非固定的细胞或组织的细胞核标记，并可通过荧光显微镜或流式细胞仪等仪器检测。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；-20℃避光保存，12个月有效。

操作步骤

      1. 将Hoechst 33342染色液（1 mg/mL）用PBS或其他合适的缓冲液稀释成0.5-10 μg/mL Hoechst 33342染色工作液；

      2. 对于固定的细胞或者组织切片：

            a. 对于固定的细胞或组织样品，固定后去除固定液，使用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min（如检测悬浮细胞，请按悬浮细胞常规操作方式进行，实验均需添加离心等步骤）；

            b. （可选步骤）如需对固定的细胞或者组织进行免疫荧光染色等处理，则优先进行相关处理，处理后再进行Hoechst 33342染色；

            c. 取适量的Hoechst 33342染色工作液对固定的细胞或者组织进行染色，覆盖样品并室温孵育5 min左右；

            d. 去除Hoechst 33342染色工作液后，用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min；

            e. 封片后或者直接置于荧光显微镜下观察，激发波长为350 nm，发射波长为460 nm。

      3. 对于活细胞或者培养组织：

            a. 细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色工作液，约1/10细胞培养基体积，须充分覆盖待染色的样品；通常六孔板一个孔中需加入1 mL染色液，96孔板一个孔中需加入100 μL染色液；于37℃培养箱中，孵育10-20 min；

            b. 去除Hoechst 33342染色工作液后，用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min；

            c. 直接于荧光显微镜下观察，激发波长为350 nm，发射波长为460 nm。

注意事项

      1. Hoechst 33342染色工作液孵育的浓度和时间，可根据实际情况进行调整。

      2. 荧光染料存在淬灭的问题，染色后尽量当日完成检测，可用抗荧光淬灭封片剂（推荐ABC1419）减缓荧光猝灭。

      3. 操作时请穿实验服，配戴一次性手套。