Hoechst 33258分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88，CAS编号为23491-45-4，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，当与双链DNA大沟结合以后荧光显著增强。最大激发波长为346 nm，最大发射波长为460 nm。Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，细胞核染色，或常规的DNA染色。可用于固定细胞、组织或非固定细胞、组织的细胞核染色，染色后可用荧光显微镜观察，或流式细胞仪检测。荧光显微镜观察时用紫外光激发，为蓝色荧光。

本产品为即用型溶液，浓度经优化可满足各种常规染色的需要。

冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期6个月。

1.对于固定的细胞或者组织切片：

a.对于固定的细胞或组织样品，固定后去除固定液，使用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min（如检测悬浮细胞，请按悬浮细胞常规操作方式进行，实验均需添加离心等步骤）；

b.（可选步骤）如需对固定的细胞或者组织进行免疫荧光染色等处理，则优先进行相关处理，处理后再进行Hoechst 33258染色；

c.直接取适量本产品Hoechst 33258染液（即用型）覆盖样品，室温避光孵育5 min左右；

d.去除染液，用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min；

e.封片后或者直接置于荧光显微镜下观察，激发波长为350 nm，发射波长为460 nm。

2.对于活细胞或者培养组织：

a.细胞培养物中加入适量本产品Hoechst 33258染液（即用型），充分覆盖待染色的样品；通常六孔板一个孔中需加入1 mL染色液，96孔板一个孔中需加入100 μL染色液；于37℃培养箱中，孵育10-20 min；

b.去除染液，用PBS或者其他合适的缓冲液洗涤2-3次，每次3-5 min；

c.直接于荧光显微镜下观察，激发波长为350 nm，发射波长为460 nm。

1. 荧光染料都存在荧光淬灭的问题，建议染色后尽快完成拍照。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片剂（推荐ABC1419）。

2. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。