本产品红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，或称ACK Lysis Buffer），是一种经典的用于去除红细胞的裂解液，在不损伤有核细胞的前提下充分去除红细胞。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离及提取等。其基本原理是利用细胞内渗透压浓度差而导致细胞膜胀破的原理裂解红细胞。主要成分包含氯化铵、碳酸氢钾、EDTA-Na2。因铵根离子无法通过细胞膜，而其他离子可以通过，造成细胞内外的离子浓度差异，外部水分扩散至细胞内，使红细胞膨胀，达到裂解效果。本产品经0.2 μm滤膜过滤除菌。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；2-8℃保存，有效期12个月。

使用方法

组织/细胞样本：

      1. 新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液，4℃条件下300-400 g离心5 min，弃去上清液；

      2. 向细胞沉淀中加入3-5 mL红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2 min；

      3. 4℃条件下300-400 g离心5-8 min，弃去上层红色清液；如裂解不完全可重复步骤2和3；

      4. 向沉淀部分加入3-5 mL Hank’s液或无血清培养液重悬，然后4℃条件下300-400 g离心3-5 min，重复此步骤2-3次，对细胞进行清洗；

      5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞，用于后续实验；如提取RNA，在步骤4开始使用无核酸酶的溶液。

血液样本：

      1. 新鲜抗凝血，离心弃去上清液；

      2. 预估细胞沉淀体积，按1:6-10比例向细胞沉淀中加入2-8℃预冷的红细胞裂解液，例如对于0.2 mL细胞沉淀，加入1.2-2.0 mL红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，4℃或室温裂解1-5 min；

      3. 4℃条件下300-400 g离心5-8 min，弃去上层红色清液；如发现红细胞裂解不完全，可重复步骤2和3一次；

      4. 向沉淀部分加入Hank’s液或无血清培养液重悬，然后4℃条件下300-400 g离心3-5 min，重复此步骤2-3次，对细胞进行清洗；

      5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞，用于后续实验；如提取RNA，最好是于步骤4开始使用无核酸酶的溶液。

注意事项

      1. 本品经过滤除菌，使用时请注意无菌操作，避免细菌污染。

      2. 后续试验如是用于细胞培养，操作过程中应注意在超净工作台中完成，并注意无菌操作，以免细胞被污染，影响细胞培养。

      3. 在离心洗涤后，如发现极微量的红细胞，可继续试验，不会影响后续检测。

      4. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。