荧光素酶体系多用于报告基因检测。将目的基因的转录调控元件克隆到荧光素酶（Luciferase）的上下游，构建成报告基因（Reporter gene）质粒。然后将质粒转染导入细胞，用药物或者其他刺激物处理转染的细胞后，收集细胞并裂解，测定裂解液中的荧光素酶活性。通过荧光素酶活性判断药物等外源刺激对目的基因的转录调控作用。

      本产品Mono-Lumi海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒（Mono-Lumi Ranilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit），利用海肾荧光素酶(Ranilla Luciferase)，在氧气存在的情况下，催化肠腔素底物(Coelenterazine)氧化生成Coelenteramide，并在此过程中产生生物荧光，产生的荧光强度和荧光素酶活性成正比的原理，可快速检测海肾荧光素酶活性。试剂盒具有检测迅速、灵敏度高，检测范围广等特点。

储存与运输

      干冰(dry ice)运输；-80℃避光保存，12个月有效；-20℃避光保存，建议6个月内使用。

操作步骤

      1. 配制1×海肾荧光素酶反应工作液：

            1.1. 试剂盒各组分取出于室温解冻融化，颠倒混匀，确保各组分完全溶解。其中Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 需置于冰上融化，离心机短时离心，确保试剂沉至管底；

            1.2. 将Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 用 Ranilla Luciferase Reaction Buffer稀释50倍，即10 μL Ranilla Luciferase Reaction Substrate (50×) 与 490 μL Ranilla Luciferase Reaction Buffer混匀，得到500 μL 1×海肾荧光素酶反应工作液备用；

            （注意按照用量配制，避免浪费。1×海肾荧光素酶反应工作液建议现配现用。）

      2. 细胞前处理以及裂解：

            2.1. 细胞提前种植于相应孔板中，并根据实验需要，对细胞进行转染或其他相关前处理；

            2.2. 对于贴壁细胞：去除原有细胞培养基后，参考下表加入对应量的Cell Lysis Buffer，使其覆盖细胞；对于悬浮细胞，转移细胞到离心管中，离心去除培养基后，参考下表加入对应量的Cell Lysis Buffer重悬细胞；

            2.3. 室温充分裂解10-20 min后，刮取细胞收集于1.5 mL离心管中，4℃，12000 g离心10 min，留取上清（细胞裂解物）备用；

      3. 海肾荧光素酶检测：

            3.1. 将提前配制好的1×海肾荧光素酶反应工作液平衡至室温，以100 μL/孔，加入到不透光的白色96孔板中；

            3.2. 第2步留取的细胞裂解上清，以20 μL/孔加到上述96孔板中；

            3.3. 水平震荡均匀，立即用Luminometer发光计、带化学发光检测模块的多功能酶标仪或其它能够检测生物发光的仪器，进行化学发光检测。

注意事项

      1. 检测前，需要将提前配制的1×海肾荧光素酶反应工作液恢复至室温再使用。

      2. Ranilla Luciferase Reaction Buffer解冻后有部分沉淀析出，属于正常现象，使用前充分震荡以确保其完全溶解。

      3. 进行多样品检测时，1×海肾荧光素酶反应工作液添加应尽量控制在短时间内，建议使用排枪进行加样，并注意排枪各孔的吸液量是否一致。

      4. 为了防止孔间干扰，推荐使用不透光白色孔板。亦可使用不透光黑色孔板，但是黑色会吸收荧光信号，降低检测的荧光信号。

      5. 为了您的健康和安全，操作时请穿好实验服、戴好手套。