PEI 40K Transfection Reagent（线性化聚乙烯亚胺转染试剂），是一种以线性化聚乙烯亚胺为主体、分子量为40000的高电荷阳离子聚合物，其本身带正电，可以有效的结合带负电的核酸，与之形成复合物，并导入到细胞中，适用于细胞的质粒DNA转染。PEI 40K（线性化聚乙烯亚胺）转染试剂细胞毒性低，转染效率高且成本低，相较于脂质体类转染试剂，性价比极高。目前已经验证线性PEI 40K转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等，转染效率高达80%~90%。本产品主要成分PEI 40K浓度为1 mg/mL。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期6个月；或者4℃放置，有效期3个月。

操作步骤

      1. 贴壁细胞转染前准备工作：

            a) 转染前一天，将细胞以合适的密度均匀种植于孔板中，以正式转染时细胞汇聚至70-85%为宜；

            b) 转染前，去除原细胞培养基，用PBS清洗1-2次后，更换1.8 mL不含血清或者低血清（5%以下）的基础培养基，或Opti-MEM；不同细胞对于血清依赖性不同，根据具体细胞种类调整。

            c) 将换好液的细胞放置于培养箱中，并开始配制转染复合物。

      2. 悬浮细胞转染前准备工作：

            a) 转染当天，将适量的细胞，离心去除培养基后，用不含血清或者低血清（5%以下）的基础培养基重悬；

            b) 将准备好的悬浮细胞放置到培养箱中，并开始配制转染复合物，转染复合物和培养基之间的体积比，可以参考贴壁细胞的比值，进行适当调整。

      3. 转染复合物准备：

            a) 配制A液：100 μL不含血清的基础培养基与2 μg质粒DNA，吹吸混匀；

            b) 配制B液：100 μL不含血清的基础培养基与6-8 μL PEI 40 K Transfection Reagent，吹吸混均；

            c) 将B液加到A液中，轻轻吹打混均，室温孵育15 min，使其形成DNA-PEI转染复合物。

      4. 转染细胞：

            a) 将上一步得到的转染复合物，以画十字或者环绕的方式，滴加到之前换好液的孔板中；

            b) 手持孔板在平面上画“8”字或其他的方式轻摇培养板，使其混合充分，置于37℃，5% CO₂培养箱中孵育；

            c) DNA-PEI转染复合物与细胞共同孵育4-6 h即有较好的转染效率，适当延长或过夜孵育，转染效率更佳。

注意事项

      1. 请使用状态良好的健康细胞，复苏的细胞建议至少传代2次后再进行转染。

      2. 请使用高质量、无内毒素的质粒DNA。

      3. 转染时高浓度血清以及抗生素的使用，可能会影响细胞状态以及转染效率。

      4. 不同的细胞耐受性、敏感性不一样，转染孵育时间长短，以及PEI/DNA使用比例，可视情况酌情调整。

      5. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。