本产品Recombinant SUMO Protease (Small Ubiquitin-related Modifier Protease)是一种常用的半胱氨酸蛋白酶（Ubl-specific protease 1, ubiquitin-like protein-specific protease 1, Ulp1），能高度特异性识别SUMO (Small Ubiquitin-Like Modifier)蛋白的三级结构，水解SUMO蛋白羧基端X-Gly-Gly-X (except Pro)肽段中Gly-Gly后的肽键，因此该蛋白酶切割融合蛋白后释放的目的蛋白不带多余氨基酸。SUMO Protease酶切反应最适pH为8.0，最适反应温度为30℃。其稳定性很好，在pH范围6.0-10.0，温度范围2-30℃，离子强度范围0-400 mM NaCl内均有较高的酶活性。在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃使用Recombinant SUMO Protease酶切过夜，同时在酶切体系中加入适当浓度DTT（0.5-2 mM）也可以显著提高酶切效率。

      应用：常用于去除融合蛋白中SUMO标签蛋白。蛋白酶本身带有His标签可以与镍柱结合。

      来源：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半胱氨酸蛋白酶，大肠杆菌重组表达，带有His标签。

      酶活定义：在30℃，pH8.0条件下，1 h内可以将2 μg底物（含有SUMO标签蛋白）切割85%以上所需酶量为一个酶活单位。

      失活或抑制：高于150 mM咪唑会影响Recombinant SUMO Protease的酶切效率。

      纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%，10 U/μL。

      Recombinant TEV protease储存液：25 mM Tris-HCl，pH 8.0，0.1% NP-40，250 mM NaCl，500 μM DTT，50% (v/v) glycerol。

      10×SUMO Buffer+Salt：500 mM Tris-HCl，pH 8.0，2% NP-40，1.5 M NaCl，10 mM DTT。

      10×SUMO Buffer - Salt：500 mM Tris-HCl，pH 8.0，2% NP-40，10 mM DTT。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。

操作步骤

      1. 蛋白酶切体系推荐：

注：对于大部分融合蛋白，SUMO Protease最适反应缓冲液中NaCl浓度为150 mM，也可以根据实际条件调整NaCl浓度（0-300 mM）

      2. 将上述反应体系置于30℃反应1、2或4 h。如果目的蛋白在30℃稳定性不好，可以考虑将反应体系置于4℃过夜酶切（约16 h左右）；

      3. 取酶切产物10 μL样品进行SDS-PAGE电泳检测，可以评估酶切用量和反应条件。

注意事项

      1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存；

      2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

酶切应用实例

图1：Recombinant SUMO Protease 酶切对照底物蛋白（SUMO+B融合蛋白）效果图（酶切条件30℃、pH 8.0，分别酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、4 h，依次对应泳道Lane：1-7，酶切体系中加入底物与酶质量比为10：1）。