本产品Recombinant HRV 3C Protease (Human Rhinovirus 3C Protease，PreScission Protease)是在大肠杆菌中重组表达带His标签（His-tag）的人鼻病毒14型3C蛋白酶(Human Rhinovirus type 14 3C Protease)，是一种常用的半胱氨酸蛋白酶，能在低温条件下特异性地识别八肽序列L-E-V-L-F-Q-G-P (Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro)或者核心五肽序列L-F-Q-G-P (Leu-Phe-Gln-Gly-Pro)，并在Q (Gln)与G-P (Gly-Pro)氨基酸残基之间进行酶切。酶的特异性强、活性高，即使在4℃低温条件下依然有很高的酶活性。

      应用：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他标签蛋白。蛋白酶本身带有His标签可以与镍柱结合。

      来源：人鼻病毒14型3C蛋白酶(Human Rhinovirus type 14 3C Protease)，大肠杆菌重组表达，含His标签。

      酶活定义：在4℃，pH 7.5条件下，16 h内可以将100 μg底物（含有HRV 3C Protease酶切位点的蛋白）切割90%以上所需酶量为一个酶活单位。

      失活或抑制：100 mM ZnCl2、4 mM AEBSF、100 μM Chymostatin都会抑制HRV 3C Protease的活性。

      纯度及浓度：SDS-PAGE检测纯度≥95%，2 U/μL。

      Recombinant HRV 3C Protease储存液：50 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，1 mM DTT，50% (v/v) glycerol，pH 8.0。

      10×HRV 3C Buffer：500 mM Tris-HCl，1.5 M NaCl，10 mM EDTA，10 mM DTT，pH 7.5。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；-20℃保存，有效期12个月。

操作步骤

      1. 蛋白酶切体系推荐：

      2. 将上述反应体系置于4℃反应过夜或16 h；

      3. 取酶切产物10 μL样品进行SDS-PAGE电泳检测，可以评估酶切用量和反应条件。

注意事项

      1. 酶制品使用时应放在冰盒内或冰浴，使用完毕后应立即放置于-20℃保存，建议分装保存；

      2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

酶切应用实例

图1：Recombinant HRV 3C Protease酶切对照底物蛋白（A+B融合蛋白，其中含有HRV 3C Protease酶切位点）效果图（酶切条件30℃、pH 7.5，分别酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h，依次对应泳道Lane：1-6，酶切体系中加入底物与酶质量比为10：1）