T4 DNA Ligase(Fast)由携带T4噬菌体gene 30的大肠杆菌产生。该酶催化双螺旋DNA或RNA之间的5'-磷酸基团和3'-羟基之间形成磷酸二酯键。该酶在双链DNA、RNA或者DNA/RNA复合物间可修复单链缺刻, 并且可以连接有粘性末端或者平末端的DNA片段，但对于单链核酸无活性，主要用于限制性内切酶酶切产物DNA片段克隆、基因定点突变与PCR产物克隆、线性DNA自环化与修复双链DNA缺刻。T4 DNA Ligase(Fast)需要ATP作为辅助因子，在室温下完成粘性末端连接反应仅需10分钟。

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