DNA提取

信息来源于:互联网 发布于:2023-06-17

核酸提取是指将核酸(DNA和RNA)从细胞中提取出来的过程,总的来说包括细胞裂解、核酸纯化及后续核酸浓度、纯度测定的步骤。根据原始样品的种类和核酸产物后续的各种应用目的,细胞裂解和核酸纯化步骤有不同的处理方法和要求。

实验室中的DNA提取:

案例一:小鼠基因型判定实验的模板DNA提取

初始样品为小鼠尾切段。基因型判定实验对DNA模板的浓度、纯度要求不高,消化提取过程相对简单。

实验步骤:

1.将1cm尾巴切段置于1.5mL微量离心管中,加入适量裂解液(Lysis buffer)和蛋白酶(Proteinase K)于55~65℃水浴过夜消化。

2.充分消化后的尾巴样品加入沉淀液(Precipitation buffer)后用旋涡混匀仪来使杂质蛋白充分沉淀,杂质沉淀后通过离心操作(如4℃,4000*g,5min),取出溶有目标DNA的上清液,丢弃杂质沉淀。

3.上清液中加入100%异丙醇,小心颠倒离心管30~40次,便可以将产物DNA沉降。离心操作(4℃,10000*g或12000rpm,10min)去除上清。

4.用75%乙醇洗涤两次DNA产物,待乙醇充分挥发后,用水或TE缓冲液(Tris-EDTA buffer)收获DNA模板产物。

进行后续的PCR扩增实验前,可以使用Nanodrop仪器来进行DNA浓度和纯度的测定来提高PCR反应的成功率。在PCR扩增实验不顺利的情况下,也可以进一步对DNA产品的完整度进行检测,具体方法可以参考核酸检测和核酸扩增的有关内容。

实验中用到的爱必胜试剂、耗材和仪器:

试剂:裂解液、蛋白酶、沉淀液、异丙醇、乙醇、TE缓冲液

耗材:枪头、1.5ml微量离心管、(15、50mL)离心管

仪器:旋涡混匀仪、分光光度仪