产地:ABC
货号:ABC2055
规格:50T
备注:1、可做任意浓度 2、可单独补充上层胶指示染料
本产品SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒,包含凝胶制备所需的所有试剂,用户只需准备少量纯水及制胶设备(制胶底座、玻璃板、梳子等),根据说明书操作即可在短时间内制得所需凝胶。本试剂盒可制备常规大小凝胶至少50块。
储存与运输
冰袋(wet ice)运输;改良型促凝剂-20℃保存,其他2-8℃避光保存,有效期12个月。
使用方法
1. 根据目的蛋白分子量和所选电泳缓冲液不同,选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶,参照表格如下:
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围(kDa) (Tris-Glycine电泳缓冲液,ABC2036) |
最佳分离范围(kDa) (SWE快速高分辨电泳缓冲液,ABC2099) |
6% | 50-300 | 15-300 |
8% | 30-130 | 10-250 |
10% | 20-100 | 5-150 |
12% | 10-60 | 3-100 |
15% | <40 | <60 |
2. 根据目标蛋白分子量大小,选取分离胶的浓度,以常用规格8.3 cm×7.3 cm凝胶板(单块)为例,可参考下表配制制胶液:
分离胶浓度 | 6% | 8% | 10% | 12% | 15% | ||||||||||
玻璃板厚度(mm) | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 |
所需制胶液总体积(mL)* | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 4.0 | 6.0 | 8.0 |
H2O(mL) | 2.16 | 3.24 | 4.32 | 1.89 | 2.84 | 3.78 | 1.63 | 2.44 | 3.25 | 1.36 | 2.04 | 2.72 | 0.96 | 1.44 | 1.92 |
30%丙烯酰胺(29:1)(mL) | 0.8 | 1.2 | 1.6 | 1.07 | 1.6 | 2.14 | 1.33 | 2.0 | 2.67 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
4×Tris-SDS分离胶缓冲液(mL) | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 | 1.5 | 2.0 |
改良型促凝剂(µL) | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 | 40 | 60 | 80 |
TEMED(µL) | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
*制胶液总体积不包含TEMED的体积。
3. 浓缩胶配制可参考下表:
浓缩胶浓度(%) | 5% | |||
H2O/mL | 1.75 | 2.63 | 3.5 | 5.25 |
30%丙烯酰胺(29:1)/mL | 0.5 | 0.75 | 1.0 | 1.5 |
4×Tris-SDS浓缩胶缓冲液/mL | 0.75 | 1.13 | 1.5 | 2.25 |
改良型促凝剂/μL | 18 | 27 | 36 | 54 |
TEMED/μL | 4.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 |
总体积*/mL | 3.0 | 4.5 | 6.0 | 9.0 |
*总体积不包含TEMED的体积。
4. 推荐电泳条件:
a. 使用SWE快速高分辨电泳缓冲液(ABC2099)进行电泳:200-250 V恒压,25-35 min可完成电泳;
b. 使用Tris-Glycine电泳缓冲液(ABC2036)进行电泳:设置电压上层胶90 V,电泳约30 min(marker进入分离胶);下层胶调整电压为150-180 V,约60-90 min(可根据实际情况调整)。
注意事项
1. 所有试剂使用前需要提前复温至室温后方可使用。
2. 改良型促凝剂相较于过硫酸铵(AP)稳定性更好,使用时拿出一支,使用结束后于4℃保存,以便后续常规使用,可保存六个月;若长期不用请放置于-20℃保存,避免反复冻融。
3. 小于10 kDa的蛋白分离建议使用Tricine胶,丙烯酰胺凝胶可能不足以分离。
4. 温度对于胶的凝固时间影响较大,为保证实验顺利进行,一般温度越低,凝固时间越长,可适当增加改良型促凝剂用量;温度越高凝胶越快,可适当减少改良型促凝剂用量。
5. 凝胶需要充分的凝固时间,建议胶制好充分静置确保凝胶彻底。
6. 当温度较低时,10%SDS溶液有结晶析出,于37℃复温融化后可继续使用。
7. 如需快速制胶试剂,可购买本公司其他产品,如SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒(ABC2055),或超快速彩色凝胶配制试剂盒系列(ABC2059/ABC2060/ABC2061/ABC2062/ABC2063,ABC2078/ABC2079/ABC2080/ABC2081/ABC2082),及高分辨超快速彩色凝胶配制试剂盒系列(ABC2084/ABC2085/ABC2086,ABC2089/ABC2090/ABC2091),可满足不同实验需求。
8. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅供科研用途,不用于临床诊断!
(产品包装升级中,以实物为准。)
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