PI，即碘化丙啶，是一种溴化乙啶的类似物，能够与DNA强力结合，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光，实现对DNA或细胞核的染色。PI不能穿透完整细胞膜，但能穿透凋亡晚期细胞及死细胞的破损细胞膜，利用该特点，PI通常与Calcein-AM或FDA等荧光探针联合使用，进行活死细胞染及观察色，或采用流式细胞仪相对定量检测细胞凋亡（apoptosis）及细胞周期。PI-双链DNA复合物的最大激发波长为535nm，最大发射波长为615nm。

      本产品PI染色液为即用型，PI浓度为100 μg/mL，可直接用于坏死细胞或组织的细胞核染色，以及细胞悬液用此染液染色后可以用于流式细胞仪检测细胞周期。

储存与运输

      冰袋（wet ice）运输；2-8℃避光保存，有效期6个月。

使用方法

      流式细胞仪检测细胞周期操作步骤：

      1. 培养好的活细胞经消化、PBS洗涤、低速离心收集得到细胞沉淀。

      2. 向细胞沉淀中缓慢加入1-3 mL -20℃预冷的90%乙醇，重悬细胞，冰浴过夜。

      3. 1500转离心5min收集细胞，以PBS重悬，再次离心，去除上清液。

      4. 加入250 μL PBS重悬细胞。

      5. 加入2 μL浓度为1 mg/mL的RNase A（推荐ABC3423、ABC3431），37℃水浴40 min。

      6. 加入50 µL PI染液，避光孵育20 min（时间可根据实验材料的染色结果调整）。

      7. 流式细胞仪检测。

      荧光显微镜观察活死细胞操作步骤：

      1. 培养好的贴壁细胞，去除培养基，用PBS清洗2次。

      2. 将PI染液用PBS稀释10-20倍，配制成至终浓度为5-10 μg/mL的PI染色工作液。向孔板内加入适量PI染色工作液覆盖细胞，室温避光孵育5-10 min。

      3. 弃去染色工作，加入PBS覆盖细胞，荧光显微镜观察。死细胞或凋亡晚期细胞的核呈红色荧光。

注意事项

      1. 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

      2. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。