免疫荧光技术利用荧光分子标记的抗体对与之结合的抗原进行定位，实现对蛋白质、聚糖蛋白、小生物分子及非生物分子等进行亚细胞可视化观察。在此过程中，组织中的自发荧光往往会严重干扰观察。自发荧光是在免疫荧光检测过程中产生的与目的信号无关的背景荧光信号的统称，其产生的原因主要来自于组织本身的组分，例如黄素、卟啉、植物叶绿素、胶原蛋白、弹性蛋白、红细胞、脂褐素等都会产生较强的自发荧光，显著影响免疫荧光实验的信噪比。此外组织固定中使用的福尔马林、多聚甲醛等物质也会产生大量的自发荧光。

本产品可有效减少组织自发荧光，提高免疫荧光检测的信噪比。其中A液有效成分为二价铜离子，可有效减少红细胞的自发荧光，B液有效成分为苏丹黑，能显著降低脂褐素引起的自发荧光。

常温避光保存，有效期12个月。

1. 免疫标记前的自发荧光淬灭：组织切片在经过抗原修复以后，用组化笔画圈圈出组织，然后滴加组织自发荧光淬灭剂A液覆盖组织室温孵育30 min，纯水洗5 min。

2. 组织切片进行常规的封闭、一抗孵育、二抗孵育、DAPI复染细胞核等免疫荧光检测步骤。

3. 免疫标记后的自发荧光淬灭：滴加组织自发荧光淬灭剂B液覆盖组织室温避光孵育5 min，流水冲洗3 min。

4. 封片：玻片置于PBS中晃动洗涤（可置于脱色摇床上）3次，每次5 min。切片稍甩干后封片，镜检。

1. 不同样本其自发荧光原理不同，使用组织自发荧光淬灭剂的效果可能会有差异。

2. 理论上讲，针对自发荧光的淬灭剂也会一定程度降低抗体的荧光强度。经测试，本试剂对自发荧光的淬灭程度远远超出抗体荧光强度的降低，在二者之间有较好的平衡。

3. 加入组织自发荧光淬灭剂B液后组织会染成深蓝色，但是不会影响荧光拍照。

4. 切片经B液孵育完以后可以用水或者PBS洗涤，但不能用含吐温的溶液洗涤，否则B液被过度洗去影响背景荧光淬灭效果。

5. 组织自发荧光淬灭剂B液每次用完后务必将瓶盖拧紧，防止溶剂挥发。

6. 操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。

左图：脊髓组织石蜡切片做NF200；右图：同一张切片经本试剂处理后再做NF200。

左图：肝组织石蜡切片做CD31；右图：同一张切片经本试剂处理后再做CD31。

左图：大鼠心肌组织石蜡切片做α-SMA；右图：同一张切片经本试剂处理后再做α-SMA。